在茶叶水浸出物中除去叶蛋白、茶多酚等物质后，留下的生物碱其测定波长为274nm者，均称茶叶咖啡碱。

    1、原理

    茶叶中的咖啡碱易溶于水，除去干扰物质后，用特定波长测定其含量。

    2、仪器和用具

    实验室常规仪器及下列各项:

    2.1 紫外分光光度仪。

    2.2 分析天平: 感量0.0001g。

    3、试剂和溶液

    本标准所用试剂，除另有规定外，均为分析纯(AR); 水为蒸馏水。

    3.1 碱性乙酸铅溶液: 称取50g碱性乙酸铅(HG 3—1396—81)，加水100mL，静置过夜。

    3.2 盐酸(GB 622—77): 0.01N溶液,取0.9mL盐酸,用水稀释1L，摇匀。

    3.3 硫酸(GB 625—77): 9N溶液，取硫酸250mL,用水稀释至1L，摇匀。

    3.4 咖啡碱标准液: 称取100mg咖啡碱(纯度不低于99％)溶于100mL水中，作为母液，准确吸取5mL加水至100mL作为工作液(1mL含咖啡碱0.05mg)。

    4、操作方法

    4.1 取样

    按GB 8302—87《茶 取样》的规定取样。

    4.2 试样的制备

    按GB 8303—87《茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定，制备试样。

    4.3 测定步骤

    4.3.1 试液的制备

    按GB 8305—87《茶 水浸出物测定》中3.4.1的规定，制备试液。

    4.3.2 测定

    用移液管准确吸取试液(4.3.1)20mL移入250mL容量瓶中，加入10mL0.01N盐酸(3.2)和2mL碱性乙酸铅溶液(3.1)，用水准确稀释至刻度，充分混匀，静置澄清过滤，准确吸取滤液50mL，注入100mL容量瓶中，加入0.2m19N硫酸溶液(3.3)，加水稀释至刻度，混匀，静置澄清过滤。用10mm比色杯，在波长274nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。

    4.3.3 咖啡碱标准曲线的制作

    分别吸取0、5、10、15、20、25、30mL咖啡碱工作液(3.4)于一组100mL容量瓶中，各加入4.0mL盐酸溶液(3.2)，用水稀释至刻度，混匀，用10mm石英比色杯，在紫外分光光度仪上选择狭缝0.1～0.18mm，在波长274nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。

    5、结果计算

    5.1 计算方法和公式

    茶叶中咖啡碱含量，以干态质量百分率表示，按下式计算:

    C 250 100

    ──×L1×──×──

    1000 20 50

    咖啡碱(％)＝───────────×100

    M×m

    式中:C——根据试样测得的吸光度(A)，从咖啡碱标准曲线上查得的咖啡碱相应含量，mg/mL；

    L1——试液总量，mL；

    M——试样用量，g；

    m——试样干物质含量百分率。

    如果符合重复性(5.2)的要求，取两次测定的算术平均值作为结果。

    5.2 重复性

    同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.2g。

    6、结果报告

    试验报告应包括下列内容:

    a. 使用的方法；

    b. 测定的结果(取小数点后一位)；

    c. 本标准中末规定的或另加的操作；

    d. 试样的名称和产地；